菌种保藏的原则：

根据微生物生理、生化特点，人工创造条件，主要是低温、干燥、缺氧三者，微生物的代谢处于不活泼、生长繁殖受抑制的休眠状态，以达到保持纯种优良性状的目的。

常见菌种保藏方法介绍：

定期移植法（也称传代培养保藏法）

将菌种接种于适宜的培养基中，待生长充分后，于4℃-6℃进行保存并间隔一定时间进行移植培养的菌种保藏方法。包括斜面培养、穿刺培养、液体培养等。

液体石蜡法（也称矿物油保藏法）

是定期移植保藏法的辅助方法。将菌种接种到适宜的斜面培养基上，在最适条件下培养至菌种长出健壮菌落后注入灭菌的液体石蜡，使其覆盖整个斜面，再直立放置于4℃-6℃保存的一种保藏方法。

瓷珠保藏法

将培养好的微生物细胞或孢子制成悬浮液，转入装有无菌多孔玻璃珠（或瓷珠）的无菌瓶中，使其吸附于玻璃珠表面，去除多余的悬浮液，低温冷冻保存的一种菌种保藏方法。

-80℃低温保藏

将菌种保藏在-80℃冰箱的一种保藏方法。原理是低温条件可减缓微生物的新陈代谢，以达到长期有效的保藏微生物。

常见菌种保藏方法操作：

液体石蜡法（也称矿物油保藏法）

将欲保存菌种接种到最适宜的培养基上；

选择纯净优质石蜡油，经121℃，30分钟灭菌，灭菌后将其放烘箱中(160℃左右)干热处理，除灭菌时渗入的水分；

待石蜡油变得清澈透明后，冷却即可加入斜面，斜面上不能出现气泡，液蜡添加量以高出斜面顶部约1cm左右为宜；

密封后保藏，保藏温度要求在4～6℃。

瓷珠保藏法

将直接2mm-3mm的瓷珠分装到小螺帽管中制成冷冻管，高压灭菌；

标记冷冻管，并在无菌条件下打开冷冻管；

将待保存菌株的新鲜培养物接入培养基中，制成菌悬液后，将菌悬液接入冷冻管中；

拧紧管帽，来回颠倒四到五次。勿使用涡旋振荡器；

待菌株吸附到瓷珠上后，将多余菌悬液吸出。

-80℃低温保藏

将培养好的菌种制成高浓度菌悬液(10⁸～10¹⁰CFU/mL)；

取灭菌甘油与菌悬液充分混匀，使甘油浓度约为20%；

混匀后分装入冷冻试管或安瓿中，于-80 ℃超低温冰箱中保藏。

菌种保藏注意事项：

适宜的培养基（定期移植法与液体石蜡法）：

细菌--营养琼脂；

真菌--PDA；

乳酸菌--MRS培养基；

厌氧菌--庖肉培养基；

嗜盐性弧菌--含3%NaCl的TSA或营养琼脂；

适宜的温度：

根据菌株特性在适宜的温度下保藏。如：副溶血弧菌、创伤弧菌、霍乱弧菌等致病弧菌，室温(25℃以下)保存，不能冷藏。

适宜的氧气条件：

根据菌株特性，提供适宜的氧气条件，如微需氧条件或厌氧条件。