检测医院污水总大肠菌群的检验方法

      检测医院污水总大肠菌群的检验方法

一、采样方法 
    用采水器或其他灭菌容器采取污水样１０００毫升，放入灭菌瓶内，如果是经加氯处理的污水，需加１.５％硫代硫酸钠５毫升中和余氯。 
    二、检验方法 
    总大肠菌群系指一群需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌在３７℃恒温箱内，培养２４小时，能使乳糖发酵产酸产气。总大肠菌群数系指每升污水中，所含的总大肠菌群的数目。 
    （一）初发酵试验：以无菌操作将各盛有３倍浓缩乳糖蛋白胨培养液５毫升的５支发酵管内，各接种污水样１０毫升，将各盛有单料乳糖蛋白胨培养液约１０毫升５支的发酵管内，各接种污水样１毫升，再将各盛有单料乳糖蛋白脏培养液约１０毫升的５支发酵管内，各接种１∶１０稀释的污水样１毫升（相当于原污水样０.１毫升）。将此１５支管已接种的发酵管置于３７℃恒温箱内，培养２４小时。 
    （二）平板分离：经培养２４小时后，将产酸产气及只产酸不产气的发酵管，分别接种于伊红美兰培养基或品红亚硫酸钠培养基上，置３７℃恒温箱培养１８～２４小时，挑选符合下列特征的菌落，取菌落的一小部分，进行涂片、革兰氏染色、镜检。 
    １.伊红美兰培养基上的菌落色泽： 
    （１）深紫黑色，具有金属光泽的菌落； 
    （２）紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落； 
    （３）淡紫红色、中心色较深的菌落。 
    ２.品红亚硫酸钠培养基上的菌落色泽： 
    （１）紫红色，具有金属光泽的菌落； 
    （２）深红色，不带或略带金属光泽的菌落； 
    （３）淡红色，中心色较深的菌落。 
    （三）复发酵试验：涂片、镜检的菌落，如为革兰氏阴性无芽孢杆菌，则挑取上述典型菌落１～３个接种于一支单料乳糖发酵管内，然后置于３７℃恒温箱内，培养２４小时，产酸产气者（包括小量产气）即证实有大肠菌群存在。

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