说明书

【产品名称】

通用名称：甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）

英文名称：Influenza A & Influenza B Nucleoprotein Antigen Test Kit

(Colloidal Gold)

【包装规格】20人份/盒

【预期用途】

应用胶体金和免疫层析技术，用于人鼻咽拭子（鼻腔擦拭液）、口咽拭子（咽喉擦拭液）和鼻腔抽吸液标本中甲型流感病毒抗原及乙型流感病毒抗原的定性测定。

本产品是利用分别能够特异性识别甲型流感病毒核蛋白、乙型流感病毒核蛋白的单克隆抗体，以免疫色谱法检测流感病毒核蛋白的试剂盒，本试剂盒可分别对样品中的甲型流感病毒或乙型流感病毒有反应，对丙型流感病毒不反应，不能用于区分病毒感染的亚型。

【检验原理】

流行性感冒是指由流感病毒引起的具有传染力的疾病，可引发肺炎或更严重的并发症。流感病毒的结构主要包括内部的核心和外部的病毒囊膜。流感病毒核心是由核蛋白卷曲包绕螺旋形核糖核酸（RNA）组成，核蛋白的抗原稳定，很少发生变异，具有型特异性。根据核蛋白抗原性的不同，可把感染人的流感病毒分为甲、乙、丙三型。

本品是由样品滴下部、试剂部和展开部三部分组成的检测板，内藏长方块状的载体。其中，试剂部包含胶体金标记抗甲型流感病毒单克隆抗体（鼠）（以下将简称为胶体金标记抗体A）、胶体金标记抗乙型流感病毒单克隆抗体（鼠）（以下将简称为胶体金标记抗体B）；展开部包含固定化的抗甲型流感病毒单克隆抗体（鼠）（以下简称为抗流感A抗体）、抗乙型流感病毒单克隆抗体（鼠）（以下简称为抗流感B抗体）及抗鼠免疫球蛋白多克隆抗体（兔）（以下简称为抗鼠免疫球蛋白抗体）。

样品从检测板的样品滴下部滴下后，胶体金标记抗体A、胶体金标记抗体B被溶解，与样品中的流行性感冒病毒抗原形成免疫复合体。免疫复合体因展开部的毛细管现象而移动，被判定部中固定化的抗流感A抗体捕捉或抗流感B抗体捕捉，于是在判定部[A]或判定部[B]因胶体金的作用形成紫红色的条带。本试剂盒的这个紫红色条带可以肉眼确定，以判断样品中是否存在甲型或乙型流行性感冒病毒。

另一方面，无论样品中是否有甲型或乙型流感病毒存在，剩余的胶体金标志抗体继续在展开部移动，在判定部[C]被固定化的抗鼠免疫球蛋白抗体捕捉，因胶体金而形成紫红色条带。这显示了胶体金标志抗体的正常移动。

【主要组成成份】

1. 检测板：20个，每个检测板在试剂部包被有胶体金标记抗甲型流感病毒单克隆抗体（鼠）、胶体金标记抗乙型流感病毒单克隆抗体（鼠），在展开部包被有抗甲型流感病毒单克隆抗体（鼠）、抗乙型流感病毒单克隆抗体（鼠）及抗鼠免疫球蛋白多克隆抗体（兔）。
2. 样本抽提液：2瓶，11ml/瓶，为含有表面活性剂的TRIS缓冲液并添加有防腐剂，可直接使用，贮存在2～30℃可稳定至有效期。

【储存条件及有效期】

铝箔袋包装，2～30℃，18个月。

开封后，30分钟内使用。

【样本要求】

1.  鼻腔抽吸液的采集方法

抽吸器一侧的管子连接在抽吸泵上，另一侧的管子从外鼻孔完全插入鼻腔，启动抽吸泵采集鼻腔液在抽吸器中。

2.  鼻咽拭子（鼻腔擦拭液）的采集方法

将棉棒完全插入鼻腔中，摩擦鼻甲数次，采集粘膜表皮。

3.  口咽拭子（咽喉擦拭液）的采集方法

将棉棒从口腔完全插入咽喉中，以咽后壁、上颚扁桃的发红部位为中心，摩擦数次，采集粘膜表皮。采集时，要注意不要触碰到唾液。

*附带的棉棒适合用于鼻腔。用市售的棉棒采集咽喉擦拭液时，请用人造丝或涤纶材料的棉球棉棒。

样本处理上的注意点：

①采集的样本应尽早按下述调制方法进行样品处理。

②因去除细胞成分会降低灵敏度，所以在进行本测试前，不要离心分离。

③所有的样本都是有感染危险的，请在处理时小心注意。

【检验方法】

1.  样本的调制方法

预先在采样用管子中加入0.5 ml样本抽提液，放在立架上。

① 鼻腔抽吸液

  将鼻腔抽吸液0.5 ml悬浊于运输培养基或2 ml生理盐水中。

在已经加入了样本抽提液的采样用管子中加入0.5 ml悬浊液，充分混合后作为样品待测。

② 鼻咽拭子（鼻腔擦拭液）、口咽拭子（咽喉擦拭液）

将采集样本后的棉棒浸在采样用管子中的样本抽提液中搅拌。从采样用管子的外侧，用手指挤压棉棒数次，使样本抽提液充分浸透棉棒，然后拔出棉棒，绞出的液体作为样品待测。

2.  检测操作方法

① 将采样用管子的样品滴下100μL（约3滴）到检测板的样品滴下部。

② 15分钟后观察检测板的判定部，按如下方法进行判定。

【参考范围】

本品的最小检出量：甲型流行性感冒病毒最小检测灵敏度为3.0×10⁴ TCID₅₀ / 每次检测。乙型流行性感冒病毒最小检测灵敏度为1.5×10⁵ TCID₅₀ / 每次检测。

参考范围确定方法：

应用阳性参考品（甲型流行性感冒病毒抗原2.4×10⁵ TCID₅₀ / 每次检测^*、乙型流行性感冒病毒抗原1.2×10⁶TCID₅₀ / 每次检测^*）弱阳性参考品（甲型流行性感冒病毒抗原4.0×10⁴ TCID₅₀ / 每次检测、乙型流行性感冒病毒抗原2.0×10⁵ TCID₅₀ / 每次检测^*）及阴性参考品（样本抽提液），进行灵敏度、特异性、重复性各种试验。

^*TCID₅₀ / 每次检测

将样品调制成10ⁿ的稀释液系列，对MDCK（Madin Darby Canine Kidney）细胞有50%的细胞变性效果（CPE）时的稀释倍数，作为10ⁿ TCID₅₀ / 每次检测的病毒感染价。

【对检验结果的解释】

  按操作方法使其发生反应，根据判定部显示的条带进行判定（从正上方往下观察判定部）。

判定部[A]及[C]双方都确认有条带（2条带）时，则判定为阳性。
* 判定部[A]处，即使是很淡的条带，但只要能确认有条带，则都判为阳性。
判定部[B]及[C]双方都确认有条带（2条带）时，则判定为阳性。
* 判定部[B]处，即使是很淡的条带，但只要能确认有条带，则都判为阳性。
判定部处没有条带，只有[C]处确认有条带（1条带）时，则判定为阴性。
* 判定部[C]处的条带即使很淡，只要肉眼能确认有条带，则表示色谱展开是正常的。

判定部[C]处确认没有条带时，则应该考虑是检测操作上有问题，或者是检测试剂质量上有问题。请再用另外的检测试剂板重新检测。
超过了判定时间的检测板，因干燥等原因，有时结果会发生变化。请在样本滴下后60分钟以内进行判定。超过60分钟时，请用其他检测板重试。

       A阳性

       B阳性

       阴性

       再检查

       再检查

       再检查

【检验方法的局限性】

1.   如果检测结果为阴性同时病人有临床症状存在，建议使用病毒分离培养进行确认，并由主治医师综合判断进行确诊。阴性结果不能完全排除流感病毒感染。

2．  为防影响质量，请保存在2～30℃中，避免高温、潮湿及阳光直射。

3．  在使用附属的棉棒时，待样本抽提后，请迅速拔去棉棒。因棉棒长时间浸在样品中，中心轴会吸水。

4．  对于会堵塞过滤网的强粘性样品，请用样本抽提液稀释之后再使用。

【产品性能指标】

根据对本产品用法和用量的研究：

应用阳性参考品（甲型流行性感冒病毒抗原2.4×10⁵ TCID₅₀ / 每次检测^*、乙型流行性感冒病毒抗原1.2×10⁶TCID₅₀ / 每次检测^*）弱阳性参考品（甲型流行性感冒病毒抗原4.0×10⁴ TCID₅₀ / 每次检测、乙型流行性感冒病毒抗原2.0×10⁵ TCID₅₀ / 每次检测^*）及阴性参考品（样本抽提液），进行灵敏度、特异性、重复性各种试验。

^*TCID₅₀ / 每次检测

将样品调制成10ⁿ的稀释液系列，对MDCK（Madin Darby Canine Kidney）细胞有50%的细胞变性效果（CPE）时的稀释倍数，作为10ⁿ TCID₅₀ / 每次检测的病毒感染价。

1.  测定范围

本品的最小检出量：甲型流行性感冒病毒最小检测灵敏度为3.0×10⁴ TCID₅₀ / 每次检测。乙型流行性感冒病毒最小检测灵敏度为1.5×10⁵ TCID₅₀ / 每次检测。

2.  对流行性感冒病毒的反应性

  ①甲型流感病毒

亚型的H1N1：5株、H2N2：3株、H3N2：7株，全被确认有反应。

  ②流感B病毒

流感B病毒9株，全被确认有反应。

与下述的病毒及细菌之间没有交叉反应。

3.  交差反应性试验

①  流感以外的病毒

腺病毒1～8,11,19,37型, 柯萨奇病毒Type A16,B1～5, 细胞巨化病毒, 艾柯病毒Type 3,6,9,11,14,18,30,肠道病毒Type 71, 单纯疱疹病毒-1, 腮腺炎病毒, 副流感病毒Type 1～3, 脊髓灰质炎病毒Type 1～3, 呼吸道合胞病毒, 鼻病毒Type 1A,13,14

  ②  衣原体及支原体

没有发现与肺炎衣原体, 鹦鹉衣原体, 沙眼衣原体, 肺炎支原体,有交叉反应。